確保ELISA數據質量：關鍵指標解讀

<p>&nbsp;<span style="font-size: 12px;"> &nbsp; &nbsp;ELISA實驗常用于檢測和定量復雜混合物中的特定蛋白質。結果出來后，需要一定的方法來評估數據是否可靠。主要從以下幾個方面進行評估：批內準確度、稀釋線性、回收率、靈敏度（檢測限）等。</span></p> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <h3><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp;&nbsp;</span>批內準確度</h3> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 1、批內準確度：通常指測試孔板之間的重復性。變異系數(CV)通常用于評估批內準確度，其值為標準差&sigma;與平均值&micro;的比值。每個樣本的%CV通常應小于10%。%CV越大，孔間差異越大，重復性越差，結果也越不可靠。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 注意：CV值過大可能由以下原因引起：移液不準確。使用前請確保移液器吸頭牢固地連接到移液器上，以確保吸取正確的液體量；試劑濺入其他孔中；樣品或試劑被細菌或真菌污染；試劑之間交叉污染；酶標板內溫度不一致。這可以通過將酶標板置于恒溫、遠離氣流的環境中孵育來避免；有些孔是完全干燥的。??這需要在孵育過程中始終蓋上酶標板的蓋子。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <h3><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 稀釋線性</span></h3> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 稀釋線性：稀釋線性是指測試樣品在不同稀釋度下結果的準確度，不同稀釋倍數下測定值與精密值的比值應在70%~130%之間。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 在沒有基質干擾的情況下，無論稀釋多少，測量值都與真實值一致。當存在基質干擾時，樣品稀釋會導致基質被稀釋，從而導致非特異性結合比例降低，測量值也會隨著稀釋倍數的變化而發生變化。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <h3><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp;&nbsp;</span>回收率</h3> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 回收率：回收率用于判斷目標物質的檢測是否受到樣品基質差異的影響。例如，待測上清液中含有大量的蛋白質，可能會阻礙抗體結合，導致信噪比升高，導致檢測到的目標物質濃度低于實際值。回收率是通過將已知濃度的目標物質加標到不同的樣品基質中來確定的。如果平均回收率為80%-120%，則認為樣品基質對準確定量分析物檢測能力的影響較小。回收率=用基質稀釋的目標物質檢測值/用基質稀釋的目標物質測定值*100%。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 如果回收率過高或過低，則表明實驗體系受到較大的復雜基質干擾。例如，當將1000pg/mL的IL-2加標到空白血清中時，回收率僅為50%，這表明血清中存在干擾因素，影響抗體與IL-2分子的結合。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <h3><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 靈敏度（檢測限）</span></h3> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 靈敏度（檢測限）：靈敏度是指能夠與背景區分開的最低分析物水平，常被稱為分析靈敏度或檢測限。一般有三個指標，分別是LOB（最低檢測限）、LOD（最低檢測限）和LOQ（最低定量限）。LOB（Limitofblank）就是我們通常所說的空白檢測限。</span></div> <div>&nbsp;</div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; &nbsp;LOB是指使用空白樣品，在一定概率下能夠測得的最高測量結果。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; LOD（LimitofDetection）就是我們通常所說的檢測限，它不使用空白樣品進行檢測，是在測試低濃度分析物樣品時，在一定的概率條件下能夠測得的最低值。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; LOQ（LimitofQuantitation）就是我們通常所說的定量限。這也是通過測試低濃度分析物樣品得到的一個較低的值。這個值的準確性是有要求的，也就是說，它不僅要能夠檢測出來，還要保證結果的準確性。打個比方：比如一個物體在遠處，隨著距離的縮短，你的眼睛從看不見（空白檢測限）到看得見（檢測限），最后到可以確認是什么物體的程度（定量限）。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <h3><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 信噪比</span></h3> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 信噪比（S/N）是信號與噪聲的比值，即樣品數據與空白數據的比值。一般以信噪比為3:1時對應的濃度或量為檢測限，以信噪比為10:1時的量為定量限。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 總之，評估ELISA實驗數據的可靠性需要綜合考慮批內精密度、稀釋線性、回收率、靈敏度以及信噪比等多個指標。只有當這些指標都符合要求時，才能認為實驗結果可靠，并為后續的研究提供有力的支持。良好的實驗操作和對這些指標的正確理解和應用，是獲得高質量ELISA數據，并最終得出可信結論的關鍵。如果實驗結果不理想，需要仔細檢查實驗的每個步驟，找出可能存在的問題并進行改進，以確保最終數據的準確性和可靠性。</span></div>