氨氯地平(ADP)ELISA試劑盒
簡(jiǎn)介
氨氯地平是一種第三代長(zhǎng)效鈣通道阻滯劑，主要用于治療高血壓和心絞痛等心血管疾病。其藥理作用包括通過(guò)減少血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，降低外周血管阻力，改善心肌供血，同時(shí)對(duì)血脂和血糖無(wú)明顯影響，具有良好的耐受性和依從性。氨氯地平還具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用，能夠抑制平滑肌細(xì)胞增殖，減少血管壁膽固醇沉積，并通過(guò)抗氧化、抗炎等機(jī)制穩(wěn)定斑塊。
本酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒可以經(jīng)濟(jì)、快速地檢測(cè)血清等樣品中的氨氯地平的殘留量。
檢測(cè)原理
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中氨氯地平和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)氨氯地平抗體，加入酶標(biāo)二抗后，形成包被抗原-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物。隨后結(jié)合的酶催化TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的氨氯地平成負(fù)相關(guān)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線可準(zhǔn)確定量樣品中氨氯地平的含量。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算所得值乘以樣品處理的稀釋倍數(shù)即為實(shí)際樣品中氨氯地平的含量。
間接競(jìng)爭(zhēng)法模式圖
按操作順序形成包被抗原-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物后，加入TMB 底物，板孔液體由無(wú)色變成藍(lán)色，再加入終止液液體變?yōu)辄S色后進(jìn)行吸光度值測(cè)定。
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檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的局限性
僅供科研使用。
試劑盒的使用期限不得超過(guò)試劑盒標(biāo)簽上的有效期。不要將試劑與其他批次或來(lái)源的試劑混合使用或替換使用。
如果樣品產(chǎn)生的值高于最高標(biāo)準(zhǔn)，則用測(cè)定稀釋劑進(jìn)一步稀釋樣品，并重復(fù)測(cè)定。稀釋劑、操作人員、移液技術(shù)、洗滌技術(shù)、培養(yǎng)時(shí)間或溫度以及試劑盒使用年限的任何變化都可能導(dǎo)致結(jié)合變化。
樣本采集、處理和存儲(chǔ)的變化可能會(huì)導(dǎo)致樣本值的差異。
本試劑盒實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)消除了不同樣品中可能潛在的干擾因素的影響，但并不能涵蓋所有潛在影響因素。不能排除存在其他干擾的可能性。
操作要點(diǎn)
為了避免交叉污染，在添加每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和試劑時(shí)應(yīng)更換移液器槍頭。
當(dāng)使用自動(dòng)洗板機(jī)時(shí)，在加入洗滌緩沖液后加入30秒的浸泡期，或者在洗滌步驟之間將板旋轉(zhuǎn)180度，可以提高測(cè)定精度。
顯色劑應(yīng)保持無(wú)色，直到添加到板中。確保顯色劑不受光線照射。
應(yīng)按照與顯色劑相同的順序?qū)⒔K止液添加到板中。加入終止液后，孔中形成的顏色將從藍(lán)色變?yōu)辄S色。藍(lán)色的孔表示終止液未與溶液充分混合。
注意事項(xiàng)
此試劑盒提供的終止液為稀硫酸溶液，具有一定腐蝕性，應(yīng)謹(jǐn)慎操作。
該試劑盒中的某些成分含有防腐劑，可能會(huì)引起皮膚過(guò)敏反應(yīng)，應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。
顯色劑B可能會(huì)引起皮膚、眼睛和呼吸道刺激，應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。
佩戴防護(hù)手套、防護(hù)服、眼睛和面部防護(hù)用品。處理后徹底洗手。
樣品預(yù)處理
下面列出的樣品收集和儲(chǔ)存條件旨在作為一般性指導(dǎo)。樣品穩(wěn)定性尚未評(píng)估。
1. 血清：將收集于血清分離管的全血樣本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，然后 3000r/min 離心10min，取上清即可檢測(cè)。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集樣本，將樣本 3000r/min 離心10min，取上清即可檢測(cè)。
3. 組織勻漿：用 PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的 PBS（一般按 1:9 的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng) 9mL的PBS）。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液 3000r/min 離心10min，取上清即可檢測(cè)。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清：3000r/min 離心10min，取上清即可檢測(cè)。
5. 尿樣：取尿樣本上清50µL進(jìn)行檢測(cè)。（如混濁需離心或過(guò)濾）
樣品稀釋倍數(shù)：0.5倍
6. 其它生物標(biāo)本：3000r/min 離心10min，取上清即可檢測(cè)。
試劑準(zhǔn)備
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配制：如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
標(biāo)準(zhǔn)品配制：試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品，準(zhǔn)備7個(gè)試管，先將2000 ppb標(biāo)準(zhǔn)品（200µL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至160 ppb（例：80µL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+920µL的1×稀釋液，制備得到1000μL的160 ppb濃度標(biāo)準(zhǔn)品），隨后在6個(gè)試管中分別加入500μL的1×稀釋液，在這6個(gè)單獨(dú)的試管中將160 ppb標(biāo)準(zhǔn)品依次2倍倍比稀釋至7個(gè)梯度，共配制7個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，依次為：160 ppb、80 ppb、40 ppb、20 ppb、10 ppb、5 ppb、2.5 ppb，從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取500μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個(gè)試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0ppb)。
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一抗工作液配制：
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×一抗工作液稀釋成1×一抗工作液，根據(jù)所需用量配置。
酶標(biāo)二抗工作液配制：
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×酶標(biāo)二抗稀釋成1×酶標(biāo)抗體工作液，根據(jù)所需用量配置。
備注：如樣本中待測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù) (建議：將待測(cè)樣本用樣品稀釋液最低稀釋1倍，在正式實(shí)驗(yàn)之前做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定具體稀釋倍數(shù)) ；標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)二抗溶液根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板孔數(shù)吸取一定量配制工作液，剩余溶液應(yīng)放回-20℃儲(chǔ)存，且避免反復(fù)凍融。（若實(shí)驗(yàn)在1-2周內(nèi)做完，標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)抗體置于2-8℃保存；若實(shí)驗(yàn)為長(zhǎng)時(shí)間跨度實(shí)驗(yàn)，建議將標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)抗體置于-20℃保存，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性）
實(shí)驗(yàn)步驟
所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣品建議復(fù)孔檢測(cè)
1. 樣本孵育：每孔分別加入50μL不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品/預(yù)處理過(guò)的待測(cè)樣品，同時(shí)加入抗試劑50µL/孔（加抗試劑時(shí)請(qǐng)使用多道移液器），蓋上封板膜在37℃下孵育30分鐘。孵育結(jié)束后，每孔加入300μL 1×洗滌緩沖液，輕輕晃動(dòng)30秒，甩干并在紙上拍干，以這種方式清洗3次。
2. 二抗孵育：每孔加入100μL酶標(biāo)抗體工作液，輕輕混勻，蓋上封板膜在37℃下避光孵育30分鐘。孵育結(jié)束后，重復(fù)步驟1中的清洗方式清洗4次。
3. 底物顯色：每孔首先加入50μL顯色液A，隨后加入50μL顯色液B，輕輕混勻，蓋上封板膜在37℃下避光孵育15分鐘。（加顯色液時(shí)請(qǐng)使用多道移液器，根據(jù)樣品和對(duì)照抗體的顏色，自行控制顯色時(shí)間）
4. 終止反應(yīng)：待顯色反應(yīng)結(jié)束后，每孔加入50μL終止液（加終止液時(shí)請(qǐng)使用多道移液器），輕輕混勻，5分鐘內(nèi)用預(yù)熱完成的酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。
實(shí)驗(yàn)步驟匯總
1. 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品和一抗，37℃反應(yīng)30分鐘，洗滌3次。
2. 加酶標(biāo)二抗，37℃反應(yīng)30分鐘，洗滌4次。
3. 加顯色液，37℃避光反應(yīng)15分鐘。
4. 加終止液，在5分鐘內(nèi)讀數(shù)。
結(jié)果的計(jì)算
以濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。或者使用能夠生成四參數(shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來(lái)創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。
若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)并在計(jì)算樣本濃度時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
數(shù)據(jù)和曲線圖詳情，請(qǐng)點(diǎn)擊下載說(shuō)明書
用戶評(píng)論(共6條評(píng)論)
酶聯(lián)生物經(jīng)過(guò)不斷的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化和改進(jìn)，積累了大量的經(jīng)驗(yàn)，擁有專業(yè)的酶聯(lián)研發(fā)團(tuán)隊(duì)。利用專業(yè)的酶聯(lián)免疫技術(shù)自主研發(fā)的elisa試劑盒，能對(duì)血清及其它樣本定量檢測(cè)抗原，定性檢測(cè)特異性抗體。優(yōu)質(zhì)的試劑，先進(jìn)的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA檢測(cè)的方便性、穩(wěn)定性、重復(fù)性和可靠性方面都具有很大的優(yōu)勢(shì)。
ELISA檢測(cè)技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
1、雙抗體夾心法檢測(cè)抗原 2、間接法檢測(cè)抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進(jìn)行樣本檢測(cè)。
以上代測(cè)費(fèi)，凡購(gòu)買本公司試劑盒，我們免費(fèi)代測(cè)！
凡購(gòu)買本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，您只需將需要檢測(cè)的動(dòng)物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey,
Pig……）種類和檢測(cè)指標(biāo)（白介素類、激素類）及標(biāo)本數(shù)量（48T/96T）通知公司業(yè)務(wù)員即可。在接到客戶標(biāo)本當(dāng)日起，現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測(cè)報(bào)告交到客戶手中！
歡迎各科研單位在各種項(xiàng)目上與我們公司開展不同層次的密切合作，以雙贏求發(fā)展，共同進(jìn)步，為中國(guó)檢測(cè)事業(yè)的發(fā)展積累經(jīng)驗(yàn)。
二、樣本要求
在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè)，對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本，請(qǐng)?jiān)炷Ｈ〔暮螅瑢?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。代測(cè)放免標(biāo)本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說(shuō)明書，具體操作注意事項(xiàng)請(qǐng)與我司技術(shù)人員溝通。
液體類標(biāo)本：標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。
血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10%（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液：用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.0-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
三、寄標(biāo)本時(shí)需注明以下情況：
1、標(biāo)本編號(hào)；2、所測(cè)項(xiàng)目；3、是否做復(fù)孔；3、聯(lián)系方式；4、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回。
客戶須知：
客戶應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。
詳解七個(gè)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)操作流程
一、樣品采集
1. 在進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測(cè)前，首先需要進(jìn)行樣品采集，樣品可以是農(nóng)產(chǎn)品、土壤、水、空氣等，在采集前需要根據(jù)檢測(cè)要求確定采樣點(diǎn)和采樣方法，并記錄采樣時(shí)間、地點(diǎn)和數(shù)量等相關(guān)信息，
2. 檢測(cè)第一步，也是最關(guān)鍵的一步，采集的樣品應(yīng)具有代表性，能夠真實(shí)反映農(nóng)產(chǎn)品的整體情況，同時(shí)，采集過(guò)程中要注意避免交叉污染，確保樣品的純凈性。
二、樣品前處理
1. 對(duì)于生物樣品（如農(nóng)產(chǎn)品等），需要進(jìn)行樣品前處理，以去除影響檢測(cè)結(jié)果的雜質(zhì)和干擾物。樣品前處理通常包括樣品分離、萃取和凈化等步驟，可以采用溶劑萃取、固相萃取、液液分配等方法進(jìn)行。
2. 采集回來(lái)的樣品需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚恚缙扑椤驖{等，以便后續(xù)的提取和分析，處理過(guò)程中要注意操作規(guī)范，避免對(duì)樣品造成污染或損失。
三、提取農(nóng)藥殘留
通過(guò)特定的提取劑和方法，將農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留提取出來(lái)，為后續(xù)的分析做好準(zhǔn)備。
四、凈化與濃縮
提取出的農(nóng)藥殘留可能含有雜質(zhì)，需要進(jìn)行凈化處理。同時(shí)，為了提高檢測(cè)靈敏度，還需要對(duì)提取液進(jìn)行濃縮。
五、檢測(cè)方法
農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法主要包括物理檢測(cè)方法和化學(xué)檢測(cè)方法。物理檢測(cè)方法包括顯微鏡檢測(cè)、紫外光檢測(cè)等，但這些方法僅能檢測(cè)到存在于樣品表面的農(nóng)藥殘留。化學(xué)檢測(cè)方法包括色譜法、質(zhì)譜法、光譜法等，具有高靈敏度、高準(zhǔn)確性和高特異性等優(yōu)點(diǎn)。
六、注意事項(xiàng)
進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測(cè)時(shí)，需要注意4個(gè)事項(xiàng)：
1. 樣品收集、保存和運(yùn)輸要求嚴(yán)格，避免污染和變質(zhì)。
2. 在操作中要注意自身防護(hù)，避免接觸有毒有害物質(zhì)。
3. 樣品前處理和檢測(cè)方法需要根據(jù)樣品特性進(jìn)行優(yōu)化和調(diào)整，避免誤差和干擾。
4. 樣品分析前需要進(jìn)行質(zhì)控和檢測(cè)方法驗(yàn)證，以保證結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
七、解決方案
針對(duì)不同的農(nóng)藥殘留檢測(cè)需求，可以采用不同的解決方案，有些實(shí)驗(yàn)室提供農(nóng)藥殘留分析服務(wù)，可以根據(jù)樣品特性和檢測(cè)要求，進(jìn)行針對(duì)性的檢測(cè)方案和操作流程，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，同時(shí)，一些農(nóng)藥生產(chǎn)企業(yè)也提供農(nóng)藥殘留檢測(cè)服務(wù)，可以提供有針對(duì)性的解決方案和專業(yè)的技術(shù)支持，在操作中需要嚴(yán)格按照樣品采集、前處理和檢測(cè)方法等環(huán)節(jié)進(jìn)行操作，并注意安全防護(hù)和質(zhì)控措施，選擇合適的解決方案和技術(shù)支持，可以提高檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性。
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