致瀉性大腸桿菌探針法雙管五重分型qPCR試劑盒(不含內(nèi)參)
產(chǎn)品及特點
致瀉性大腸桿菌(Diarrheagenic Escherichia coli，DEC，致瀉性大腸埃希氏菌)是引起引起腸道內(nèi)急性腹瀉的大腸桿菌統(tǒng)稱。我國發(fā)生的食物中毒事件中，細菌性食物中毒的人數(shù)，占總中毒人數(shù)的42.8％，致瀉性大腸桿菌根據(jù)其毒力因子、致病機理和流行病學特征可分為5類，分別是腸道聚集性大腸桿菌(Enteroaggregative Escherichia coli，EAEC)、腸道致病性大腸桿菌(Enteropathogenic Escherichia coli，EPEC)、腸道侵襲性大腸桿菌(Enteroinvasive Escherichia coli，EIEC)、產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(Shigatoxin-producing Escherichia coli，STEC)或稱為腸道出血性大腸桿菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC)、產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)。感染致瀉性大腸桿菌型別不同，臨床癥狀也有一定的差異，給針對性治療帶來困擾。因此快速檢測和對致瀉性大腸桿菌進行分型具有重要意義。本產(chǎn)品就是為滿足此需求的探針法PCR試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)致瀉性大腸桿菌DNA高度保守區(qū)設(shè)計，不會跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 可以用于分型，兩管式擴增，一次能區(qū)分5種致瀉性大腸桿菌。
6. 用于定量檢測和分型，不建議用于定量。分型后可以再另購定量試劑盒。
7. 本產(chǎn)品足夠100次20μL體系的兩管式5重探針法qPCR反應(yīng)，足夠檢測50個樣本（算上對照，每個樣本測兩次）。
8. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分
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規(guī)格
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包裝
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2×Probe qPCR MasterMix
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0.5 mL×2
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0.5mL本色管
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熒光PCR專用模板稀釋液
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1mL
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1.5mL綠蓋管
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三重致瀉性大腸桿菌探針法qPCR引物-探針混合液干粉（EAEC、EPEC、EIEC）
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50次
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0.5mL棕塑蓋
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雙重致瀉性大腸桿菌探針法qPCR引物-探針混合液干粉（ETEC、STEC）
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50次
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0.5mL棕塑蓋
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EAEC探針法qPCR陽性對照(1×10E4拷貝/μL)
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50次
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0.5mL棕塑蓋
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EPEC探針法qPCR陽性對照(1×10E4拷貝/μL)
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250uL
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0.5mL黃蓋管
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ETEC探針法qPCR陽性對照(1×10E4拷貝/μL)
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250uL
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0.5mL黃蓋管
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STEC探針法qPCR陽性對照(1×10E4拷貝/μL)
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250uL
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0.5mL黃蓋管
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超純水
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250uL
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1.5mL藍蓋管
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使用手冊
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1份
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無
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本產(chǎn)品采用十一孔盒包裝
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| 保存條件 |
-20℃保存 |
| 自備試劑 |
樣品DNA |
| 保質(zhì)期 |
1年 |
用戶評論(共6條評論)
酶聯(lián)生物經(jīng)過不斷的實驗優(yōu)化和改進，積累了大量的經(jīng)驗，擁有專業(yè)的酶聯(lián)研發(fā)團隊。利用專業(yè)的酶聯(lián)免疫技術(shù)自主研發(fā)的elisa試劑盒，能對血清及其它樣本定量檢測抗原，定性檢測特異性抗體。優(yōu)質(zhì)的試劑，先進的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件。ELISA檢測的方便性、穩(wěn)定性、重復性和可靠性方面都具有很大的優(yōu)勢。
ELISA檢測技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
1、雙抗體夾心法檢測抗原 2、間接法檢測抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進行樣本檢測。
以上代測費，凡購買本公司試劑盒，我們免費代測！
凡購買本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，您只需將需要檢測的動物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey,
Pig……）種類和檢測指標（白介素類、激素類）及標本數(shù)量（48T/96T）通知公司業(yè)務(wù)員即可。在接到客戶標本當日起，現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測報告交到客戶手中！
歡迎各科研單位在各種項目上與我們公司開展不同層次的密切合作，以雙贏求發(fā)展，共同進步，為中國檢測事業(yè)的發(fā)展積累經(jīng)驗。
二、樣本要求
在收集標本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標本盡早檢測，對收集后當天就進行檢測的標本，及時儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶吮荆堅炷Ｈ〔暮螅瑢吮炯皶r分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實驗質(zhì)量，所以避免反復凍融。代測放免標本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書，具體操作注意事項請與我司技術(shù)人員溝通。
液體類標本：標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。
血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10%（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.0-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
三、寄標本時需注明以下情況：
1、標本編號；2、所測項目；3、是否做復孔；3、聯(lián)系方式；4、實驗后標本是否寄回。
客戶須知：
客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔。
PCR試劑盒成功的重要要素及注意事項
模板降解
1. 盡量選擇新鮮提取的模板進行 PCR 擴增，通過凝膠電泳檢測模板的完整性，若降解嚴重需要重新制備模板。
2. 模板避免反復凍融。
模板中含有抑制 DNA 聚合酶活性的抑制劑
1. 采用離心柱法提取核酸，純化模板，消除抑制劑的干擾。
2. 適當減少模板量，采用梯度稀釋摸索最佳模板量。
3. 選用抗逆性強的 DNA 聚合酶。
模板量太低
1. 適當增加模板量。
2. 模板為 cDNA 時，選用目的基因表達量高的組織提取高質(zhì)量 RNA 并選用基因克隆專用的反轉(zhuǎn)錄試劑盒得到的 cDNA 作為模板。
3. 選用靈敏度高的 DNA 聚合酶。
高GC, 復雜模板
1. 使用 PCR 添加劑（比如 DMSO，甜菜堿）或 GC enhancer，促進高 GC，復雜序列模板雙鏈解離從而有利于引物退火和序列延伸。
2. 增加變性時間或溫度，使 DNA 雙鏈徹底解離。
3. 選用適用于高 GC，復雜模板擴增的 DNA 聚合酶。
長片段
1. 確保模板的完整性。
2. 選擇適用于長片段擴增的 Taq DNA 聚合酶或者超強高保真 DNA 聚合酶。
3. 在試劑盒說明書建議的延伸速度基礎(chǔ)上適當延長延伸時間。
4. 采用抑制熱交錯 PCR（Suppression Thermo-Interlaced PCR, STI PCR）策略。
引物降解
重新合成高質(zhì)量引物，少量分裝保存，防止多次凍融，避免長期置于冰箱冷藏部分。
引物設(shè)計不合理
1. 建議使用引物設(shè)計軟件（比如Primer premier 6, Oligo 7等）設(shè)計并選取評分較高的引物。
2. 確保引物和模板結(jié)合的特異性。
DNA 聚合酶及其他反應(yīng)組分
1. DNA 聚合酶選擇不合適
2. 根據(jù)實驗目的選擇合適的 DNA 聚合酶，比如分子克隆實驗中涉及到序列的高保真擴增，需要選擇一款針對不同類型序列具有普適性的高保真酶。
DNA 聚合酶活力下降
檢查試劑是否過期，按照說明書要求合理保存試劑。
反應(yīng)緩沖液體系與目的基因不匹配
不同目的 PCR 反應(yīng)要求反應(yīng)緩沖液中的鎂離子、鉀離子、銨離子、化學添加劑等成分濃度是不一樣的，建議使用試劑盒中優(yōu)化好的緩沖液體系。
反應(yīng)條件
退火溫度不合適，影響引物與模板特異結(jié)合
1. 使用引物設(shè)計軟件建議的退火溫度，退火溫度一般比引物的 Tm 值低 5 ℃。
2. 不同的試劑鹽離子濃度不同，最佳的退火溫度可能存在差異，建議以軟件建議退火溫度為中心設(shè)置溫度梯度，來獲得最佳退火溫度。
3. 設(shè)置降落 PCR（Step-down）反應(yīng)程序。
其他反應(yīng)條件不合適
不同的 DNA 聚合酶試劑最佳反應(yīng)條件是有差別的，選用試劑說明書建議的變性溫度和時間，退火時間，延伸溫度和速度，循環(huán)數(shù)。
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